home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9604b.zip / M9640691.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-03-04  |  4KB  |  54 lines
  1.        Document 0691
  2.  DOCN  M9640691
  3.  TI    Detection of intracytoplasmic cytokine using flow cytometry and directly
  4.        conjugated anti-cytokine antibodies.
  5.  DT    9604
  6.  AU    Prussin C; Metcalfe DD; Allergic Diseases Section, National Institute of
  7.        Allergy and; Infectious Diseases, Bethesda, MD 20892-1888, USA.
  8.  SO    J Immunol Methods. 1995 Dec 15;188(1):117-28. Unique Identifier :
  9.        AIDSLINE MED/96140787
  10.  AB    Recently, there have been several reports demonstrating improvements in
  11.        the flow cytometric detection of intracellular cytokines. These
  12.        advances, although significant, have not yielded techniques that have
  13.        easily been translated into broad use. To address this issue, we have
  14.        coupled a fixation and permeabilization method with the use of directly
  15.        labelled monoclonal anti-cytokine antibodies, providing both improved
  16.        signal and simpler staining. The kinetics of in situ cytokine production
  17.        in both CD4 and CD8 cells are shown for IL-2, IL-4, IL-5 and IFN-gamma.
  18.        Based on these data, 6 h was chosen for optimal detection of this
  19.        combination of cytokines. We show the specificity of this technique by
  20.        blocking cytokine staining using a molar excess of recombinant cytokine.
  21.        Additionally, unlabelled anti-cytokine antibodies are demonstrated to
  22.        block specific staining of labelled antibody, providing an objective
  23.        means to place statistical markers. Using such controls, we routinely
  24.        detected as few as 0.1% false positive cells, allowing the flow
  25.        cytometric detection of IL-5, which is below the threshold of detection
  26.        of published methods. To further prove the specificity of staining, we
  27.        stained using two anti-IL-5 mAbs known to recognize different epitopes
  28.        and demonstrate that the same cells stain with both antibodies. Without
  29.        permeabilization we could detect a fraction of cells with low intensity
  30.        staining for cytokine. This staining was further examined using
  31.        differential two color staining for intracellular and extracellular
  32.        cytokine, clearly demonstrating no cells staining exclusively for
  33.        extracellular cytokine, confirming a lack of passive transfer of
  34.        cytokine to nearby cells. We show that cytokine flow cytometry is useful
  35.        in examining the increased IL-5 production characteristic of
  36.        eosinophilic states and that IL-5 production is limited to the CD27
  37.        negative subpopulation. These data illustrate the unique capability of
  38.        cytokine flow cytometry to correlate cytokine expression with cell
  39.        surface phenotype without cell separation. In summary, using directly
  40.        conjugated anti-cytokine antibodies, cytokine flow cytometry becomes a
  41.        specific and versatile technique for the assessment of complex cytokine
  42.        production phenotypes in fresh ex vivo T cell subpopulations.
  43.  DE    *Antibodies/PHARMACOLOGY  Antibodies, Monoclonal/PHARMACOLOGY  Antibody
  44.        Specificity  Binding Sites, Antibody  Binding, Competitive/IMMUNOLOGY
  45.        Cytokines/*ANALYSIS/*IMMUNOLOGY/PHARMACOLOGY
  46.        Cytoplasm/*CHEMISTRY/IMMUNOLOGY  CD4 Lymphocyte Count
  47.        Eosinophilia/IMMUNOLOGY  Flow Cytometry  Fluorescent Antibody Technique,
  48.        Direct  Human  Interleukin-5/ANALYSIS  Kinetics  Membrane
  49.        Proteins/ANALYSIS  Recombinant Proteins/PHARMACOLOGY  JOURNAL ARTICLE
  50.  
  51.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  52.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  53.  
  54.